Benicio Del Toro est né à Miramar à Porto Rico le 19 février 1967 de parents avocats. Il fait des études commerciales à l'University of California de San Diego mais ses succès au théâtre l'encouragent à abandonner cette voie pour tenter sa chance comme acteur. Il prend alors des cours avec Stella Adler à Los Angeles ainsi qu'à la Circle in the Square Theater School de New York.
Benicio del Toro débute dans des petits rôles pour la télévision dès les années 80, mais sa carrière ne décolle véritablement qu'en 1995, grâce à sa performance dans le film The Usual Suspects. Il décroche ensuite un rôle dans The Funeral d'Abel Ferrara, puis, en 1998 dans le film devenu culte : Las Vegas Parano, aux côtés de Johnny Depp.
Deux ans plus tard il est à l'affiche du film Traffic pour lequel il remporte un Oscar du meilleur second rôle. Il a alors une longue liaison avec l'actrice Chiara Mastroianni, après une aventure avec l'actrice Alicia Sylverstone.
En 2003, il apparaît dans deux films à succès : Traqué, avec Tommy Lee Jones et 21 grammes, avec Sean Penn et Naomi Watts.
En 2006, il joue dans Sin City aux côtés de Bruce Willis et Jessica Alba, avant d'entamer le tournage de Guerilla, en 2007, dans lequel il incarne la figure de Che Guevara.
Voir un extrait de Las Vegas Parano avec Johnny Depp et Benicio Del Toro:
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